什么是退火
发布时间:2025-10-09 | 来源:互联网转载和整理
退火“生物化学概念名词,与生物化学概念名词复性同义。
DNA分子受热变性,双链分开,若再缓慢冷却至室温,则在260nm处吸光度降到变性前的值,这一过程称为“退火”。经退火处理可使变性DNA的两条多核苷酸链重新聚合成双链螺旋结构,恢复其本来的理化性质和生物学功能。
应用:
用于聚合酶链式反应(PCR)。
标准的PCR过程分为三步:
1、DNA变性:(90℃-96℃):双链DNA模板在热作用下,氢键断裂,形成单链DNA
2、退火:(60℃-65℃):系统温度降低,引物与DNA模板结合,形成局部双链。
3、延伸:(70℃-75℃):在Taq酶(在72℃左右,活性最佳)的作用下,以dNTP为原料,从引物的3′端开始以从5′→3′端的方向延伸,合成与模板互补的DNA链。
每一循环经过变性、退火和延伸,DNA含量即增加一倍。现在有些PCR因为扩增区很短,即使Taq酶活性不是最佳也能在很短的时间内复制完成,因此可以改为两步法,即退火和延伸同时在60℃-65℃间进行,以减少一次升降温过程,提高了反应速度。
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